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    发布时间 :2022-08-19浏览次数 :3098

    AFLP技术服务

    AFLP标记技术是1993年由荷兰的Zabeau和Vos博士提出并完善的。现已广泛应用于生物多样性 ,指纹图谱的构建,遗传图谱的构建,基因克隆等诸多研究领域,显示了广阔的应用前景。AFLP与其他分子标记相比具有 :1、DNA 用量少;2、可重复性好;3 、多态性强;4、分辨率高;5、样品适用性广,6、对基因组序列信息依赖性低等优点 。在物种的多态性分析中获得广泛的应用。AFLP的选择扩增产物目前主要通过两种方法进行分离检测,传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的方法和自动化程度较高的毛细管凝胶电泳进行检测。

    PAGE方法主要是AFLP的选择扩增产物经过聚丙烯酰胺凝胶电泳得到分离,然后通过银染将条带显现出来,然后通过照相得到相应的图片,优点是引物可以是普通引物,价格相对较低,做少量样本或者大量样本的引物筛选比较合适,另外还可以对差异条带进行克隆测序,获得差异条带的序列信息。

    毛细管电泳检测方法的优点是自动化,可以对大量样本进行实验,速度快,后期的条带读取可以依靠软件,降低了人为读取的标准不一 。

    1)AFLP服务内容

    1 样本基因组DNA的提取

    2 筛选多态性较好的引物(酶切,预扩 ,选择性扩增)

    3-1 在ABI3730xl测序仪上完成数据采集

    3-2 或是在JY-CX2B型 测序电泳槽上完成PAGE 检测(可以回收差异带)

    4 数据分析:和客户详细沟通,确认分析方案 :读取01矩阵(PAGE胶读取另外收费);聚类分析;多样性分析;多态位点数(AP)  、多态位点百分率( P) 、平均等位基因数(N a) 、有效等位基因数(N e) 、Nei′s基因多样性指数(H) 、Shannon′s信息指数( I) 、遗传分化度(Gst)等 。利用NTSYS进行聚类分析 。

    2)目前已经进行的样本类型 :树木 ,草,花卉,昆虫,鱼类,虾类,真菌等;

    3)客户提供:

    ★ 基因组DNA:

    ●至少15μL样品,浓度为50-100ng/μL;

    ●2%琼脂糖电泳检测有DNA主带,没有降解;

    ●DNA经过DNA纯化试剂盒或磁珠纯化;

    ●DNA需溶解在TE或灭菌的去离子水里;

    ●DNA溶解后 ,肉眼看不到杂色;

    ★ 植物材料: 新鲜组织,叶片采用硅胶干燥后或干冰运输;

    ★ 动物材料: 新鲜组织 ,无水乙醇封存低温运输;

    4)报价体系:


    AFLP毛细管电泳检测按96个样本随机8对引物计算 ,提供01矩阵
    项目单价(元)数量金额备注
    DNA提取3096288096个样品
    纯化1096960
    引物30000FAM标记,其他标记350元
    酶切40963840
    预扩15961440
    选择性扩增1076876808对引物
    毛细管检测80086400
    读带、分析

    议价
    合计

    23200
    AFLP按照50个样本随机8对引物计算,提供PAGE胶图
    项目单价数量金额备注
    DNA提取3050150050个样品
    纯化1050500
    酶切40502000
    预扩1550750
    选择性扩增1040040008对引物
    PAGE检测80086400
    读带、分析

    议价
    合计

    15150

    AFLP技术服务1

    AFLP技术服务2



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